皖仪科技液相色谱
测定酱油中黄曲霉毒素·柱后碘试剂衍生专机系统
继前期文章《应用案例 | 皖仪科技液相色谱测定黄曲霉毒素》（点击蓝色标题阅读原文）采用了光化学衍生器检测了中药材中黄曲霉毒素中B族和G族化合物。本篇文章参考了《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》GB 5009.22-2016第三法高效液相色谱-柱后碘试剂衍生方法条件，采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置荧光检测器、柱后衍生系统进行检测。
1 实验方法
1.1 仪器配置
皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列
1.2 测试条件
液相色谱条件流动相：A相，水；B相，乙腈-甲醇（50+50）；
等梯度洗脱条件：A，61%；B：39%；
色谱柱：C18 5μm, 4.6×250mm；
柱温：40℃；
流速：1.0 mL/min；
进样量：50μL；
柱后衍生系统衍生溶液：0.05%碘溶液；
衍生溶液流速：0.2mL/min；
衍生反应管温度：70℃；激光波长：360nm；发射波长：440nm。
1.3 试剂及实验材料
甲醇（CH3OH）：色谱纯；
乙腈（CH3CN）：色谱纯；
氯化钠（NaCl）；
磷酸氢二钠（Na2HPO4）；
磷酸二氢钾（KH2PO4）；
氯化钾（KCl）；
盐酸（HCl）；
吐温-20（C58H114O26)；
碘衍生使用试剂：碘（I2）；
混合标准溶液（AFT B1和AFT G1：1μg/mL，AFT B2和AFT G2：0.3μg/mL）；
免疫亲和柱；
一次性注射器；
微孔滤膜（0.22μm、0.45μm）；
涡旋混合器；
超声波清洗机；
离心机：转速≥6000 r/min；
氮吹仪。
1.4 溶液配制
n 1.4.1乙腈-甲醇溶液（50＋50）
取500mL乙腈加入500mL甲醇。
n 1.4.2磷酸盐缓冲溶液（PBS）
称取8.00g氯化钠、2.92g十二水磷酸氢二钠、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解，用盐酸调节pH至7.4，用水定容至1000mL。
n 1.4.3 1%吐温-20的PBS
取10mL 吐温-20,用PBS定容至1000mL。
n 1.4.4 0.05%碘溶液
称取0.1g碘，用20mL甲醇溶解，加水定容至200mL，用0.45μm的滤膜过滤，现配现用。
n 1.4.5混合标准工作液（AFT B1和AFT G1：100ng/mL，AFT B2和AFT G2：30ng/mL）
准确移取混合标准溶液（AFT B1和AFT G1：1μg/mL，AFT B2和AFT G2：0.3μg/mL）1mL，用乙腈稀释并定容至10mL。密封后避光-20℃下保存，三个月内有效。
n 1.4.6标准系列工作溶液
分别准确移取混合标准工作液10μL、50μL、200μL、500μL、1000μL、2000μL、4000μL至10mL容量瓶中，用初始流动相定容至刻度（含AFT B1和AFT G1浓度为0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL，AFT B2和AFT G2浓度为0.03ng/mL、0.15ng/mL、0.6ng/mL、1.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL、12ng/mL的系列标准溶液。
2 结果与讨论
2.1 标准曲线
图1 黄曲霉毒素G2标准曲线及相关系数
图2 黄曲霉毒素G1标准曲线及相关系数
图3 黄曲霉毒素B2标准曲线及相关系数
图4黄曲霉毒素B1标准曲线及相关系数
说明：黄曲霉素素G2、G1、B2与B1标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.9999，满足实验分析需求。
2.2标准品
图5 黄曲霉毒素G2G1B2B1标准品色谱图
表2黄曲霉毒素G2G1B2B1标准品色谱参数表
说明：由上述混标谱图可见，标准品分离较好，分离度在2.0以上，满足分离要求。
2.3 重复性
图6 黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1标准品重复性实验色谱图
表3黄曲霉毒素G2色谱参数
表4黄曲霉毒素G1色谱参数
表5黄曲霉毒素B2色谱参数
表6黄曲霉毒素B1色谱参数
说明：黄曲霉毒素G2保留时间RSD值为0.116%，峰面积RSD值为0.620%；黄曲霉毒素G1保留时间RSD值为0.104%，峰面积RSD值为0.575%；黄曲霉毒素B2保留时间RSD值为0.100%，峰面积RSD值为0.259%；黄曲霉毒素B1保留时间RSD值为0.114%，峰面积RSD值为0.346%，重复性较好。
2.4 检出限
图7黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1标准品色谱图
表7黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1色谱参数
表8黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1检测限
2.5 样品测试
n 2.5.1样品提取
称取5.0039g酱油于50mL离心管中，加入甲醇定容至25mL,涡旋混匀，置于超声波中振荡20min，在6000 r/min下离心10 min,取上清液备用。
n 2.5.2样品净化
2.5.2.1上样液的准备准确移取4mL上述上清液，加入46mL 1% 吐温-20的PBS，混匀。2.5.2.2免疫亲和柱的准备将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。
n 2.5.2.3试样的净化
免疫亲和柱内的液体放弃后，将上述样液移至50mL注射筒中，调节下滴速度，控制样液以1mL/min～3mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后，往注射筒内加入2×10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后，在亲和柱下部放置10mL刻度试管，取下50mL的注射器筒，2×1mL甲醇洗脱亲和柱，控制1mL/min～3mL/min的速度下滴，收集全部洗脱液至试管中。在50℃下用氮气缓缓将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中进样。进样量取50μL上样分析，检测谱图如下：
图8酱油样品色谱图
说明：从检测结果可知，酱油样品中未检出黄曲霉毒素G2G1B2B1，结果正常。
3 结论
本次采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置荧光检测器、柱后衍生系统，依据《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》GB 5009.22-2016第三法高效液相色谱-柱后衍生法。实验结果显示，黄曲霉毒素G2G1B2B1的线性良好，R值均在0.999以上，各黄曲霉毒素峰型较好，分离度均在2.0以上，分离效果好。黄曲霉毒素G2G1B2B1的定性RSD（%）和定量RSD（%）均小于1%，符合标准。说明了该方法配备皖仪科技LC3200系列仪器检测黄曲霉毒素的可行性，完全满足黄曲霉毒素的检测要求。
本文地址： https://www.xsyiq.com/51698.html
网站内容如侵犯了您的权益，请联系我们删除。
